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分子荧光光度计的“光谱带宽”分析
  • 发布日期:2020-09-21     信息来源:公司新闻      浏览次数:203
    •    分子荧光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光。

        光谱带宽是某一台分光光度计将氘灯或钨灯发出的光经过仪器分光,分出中间固定范围的光来透过样品,进行分析,这个固定的范围就是这台仪器的光谱带宽。光谱带宽用纳米(nm)表示。光谱带宽也是分析误差的主要来源之一。
        理论上讲,朗伯-比尔定律只适用于单色光,但在实际的吸收光谱仪器中,绝对不可能从光谱仪器的单色器上得到真正的单色光,只能得到波长范围很窄的光谱带,因此,进入被测样品的光仍然是在一定波段范围内的复合光。
        由于物质对不同波长的光具有不同的吸光度,因此,在实际工作中即使用高级的分光光度计、采用很小的光谱带宽,仍然会产生郎伯-比尔定律的偏离。目前国际上对光谱带宽的测试方法一般采用“谱线轮廓法”。主要是选用某些光源的特征谱线,对它进行光谱扫面,绘出该谱线的轮廓,再测出该谱线的半峰高的宽度即为光谱带宽。特别是656.1nm这根线,常被绝大多数科技工作者使用。具体做法如将仪器在660-470nm范围内扫描,求出656.1nm这根特征谱线的半宽度即是光谱带宽。
        分子荧光光度计的光谱带宽(SBW)/自然带宽(NBW)≤0.1时,仪器可满足绝大部分试样的分析,并且分析准确度很高。这里所说的自然光谱带宽是指试样吸收带的半高度的宽度。光谱带宽越小越好,但光谱带宽越小,也带来很多问题,例如能量和信噪比等降低,反过来影响测试结果,所以选择适当的光谱带宽来检测特定的待测液其实是很重要。

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